TICAM-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-414627

Übersicht

TICAM1 kodiert TICAM-1 (auch als TRIF bekannt), einen zytosolischen Adapter, der Toll-like-Rezeptor 3 sowie den TRAM-abhängigen Zweig der TLR4-Signalübertragung mit angeborenen immunologischen Transkriptionsprogrammen koppelt. Nach Aktivierung des Rezeptors koordiniert TICAM-1 den Aufbau von Signalkomplexen, die TBK1/IKKε und IRF3 einbinden, um Typ-I-Interferonantworten zu induzieren; außerdem trägt es zur Aktivierung der NF-κB- und MAPK-Signalwege bei und beeinflusst so die Expression entzündlicher Zytokine. Dieser Knotenpunkt ist zentral für die antivirale Erkennung von dsRNA und die Regulation der Homöostase der angeborenen Immunität in myeloiden und epithelialen Kompartimenten. Eine fehlregulierte TICAM-1-Signalgebung wurde mit veränderten Wirtsantworten auf Virusinfektionen und mit inflammatorischen Phänotypen in Verbindung gebracht, die für Mechanismen immunvermittelter Erkrankungen relevant sind.

Das TICAM-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TICAM1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TICAM1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TICAM1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TICAM-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TICAM1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TICAM-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TICAM1-Exone abzielen, die für die TICAM-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TICAM1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TICAM-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TICAM-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TICAM1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TICAM-1 HDR-Plasmid (h) und TICAM-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TICAM1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TICAM1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.