Tiam2 Double Nickase Plasmid (h): sc-404326-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Tiam2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Tiam2 Double-Nickase-Plasmid (h) und Tiam2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TIAM2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Tiam2: sc-514090
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Tiam2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404326-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Tiam2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404326-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TIAM2 kodiert Tiam2, einen Rac-spezifischen Guanin-Nukleotid-Austauschfaktor (GEF), der die Umwandlung von Rac1/2 in den aktiven, GTP-gebundenen Zustand fördert und so Signale von vorgeschalteten Rezeptoren und Adhäsionsreizen mit dem Umbau des Aktinzytoskeletts verknüpft. Über die Regulation der Lamellipodienbildung, der Zellpolarität und des Turnovers fokaler Adhäsionen trägt Tiam2 zu Signalwegen bei, die Migration, Invasion und Neuritenauswachsung steuern, einschließlich Signal-Knotenpunkten downstream von Integrinen, Wachstumsfaktorrezeptoren und PI3K. Die TIAM2-Aktivität überschneidet sich mit der Signalverschaltung der Rho-Familie von GTPasen sowie MAPK-assoziierten Programmen, die Zytoskelettdynamik mit transkriptionellen Antworten koordinieren. Fehlregulierte Rac-Signalgebung und veränderte TIAM2-Expression wurden in mehreren Krebs-Kontexten mit Tumorzellmotilität und metastatischen Eigenschaften in Verbindung gebracht, was TIAM2 als mechanistisches Ziel in Studien zu Zellbewegung und Morphogenese stützt.
Tiam2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TIAM2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TIAM2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TIAM2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TIAM2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.