Plasmide CRISPR d'Activation (h) Thy-1/CD90: sc-400608-ACT

THY1 code la glycoprotéine de surface Thy-1/CD90, ancrée au glycosylphosphatidylinositol (GPI), un régulateur des interactions cellule–cellule et cellule–matrice qui module l’adhérence, la migration et l’organisation du cytosquelette. Par ses interactions avec les intégrines et des composants de la matrice extracellulaire, Thy-1/CD90 influence la dynamique des adhésions focales et les voies de mécanotransduction liées aux états d’activation cellulaire. Elle est largement utilisée comme marqueur de lignée et d’activation dans des contextes stromaux, endothéliaux et immunitaires, et son expression est fréquemment étudiée dans des processus tels que le remodelage tissulaire et la fibrose, la neuro-inflammation et la croissance des neurites, ainsi que la signalisation du microenvironnement tumoral. Une expression dérégulée de THY1 a été associée à des mécanismes pathologiques inflammatoires et fibrosants, ainsi qu’à une altération du dialogue stroma–immunité en cancérologie.

Thy-1/CD90 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de THY1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Thy-1/CD90 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus THY1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription THY1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Thy-1/CD90. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus THY1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Thy-1/CD90 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Thy-1/CD90 dans les cellules tumorales présentant une expression de THY1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.