Thrombin R Double Nickase Plasmid (h): sc-400556-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Thrombin R Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Thrombin R Double-Nickase-Plasmid (h) und Thrombin R Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf F2R abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Thrombin R: sc-13503
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Thrombin R Double Nickase Plasmid (h) | sc-400556-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Thrombin R Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400556-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
F2R kodiert den Thrombinrezeptor (proteaseaktivierter Rezeptor 1, PAR1), einen GPCR, der durch eine thrombinvermittelte proteolytische Spaltung aktiviert wird. Dabei wird ein „tethered ligand“ (gebundener Ligand) freigelegt und eine Signalübertragung über die Gαq-, Gα12/13- und Gαi-Wege initiiert. Die Aktivierung von PAR1 reguliert die Thrombozytenaktivierung, die Funktion der Endothelbarriere, den Gefäßtonus und die Leukozytenmigration über nachgeschaltete MAPK-, RhoA/ROCK-, PI3K-AKT- und NF-κB-Signalwege. Durch die Integration von Gerinnungs- und Entzündungssignalen trägt F2R zur Hämostase, zur Thromboinflammation und zum Gewebeumbau bei. Eine fehlregulierte PAR1-Signalgebung wurde mit Thrombosen, Atherosklerose, sepsisassoziierter Koagulopathie, Fibrose und Interaktionen im Tumormikromilieu in Verbindung gebracht und unterstützt mechanistische Studien in der Gefäßbiologie sowie in der Krebsforschung.
Thrombin R Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des F2R-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von F2R abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die F2R-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit F2R-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.