THOC1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403390

Übersicht

THOC1 kodiert eine zentrale Untereinheit des THO/TREX-Komplexes, der Transkription mit der mRNA-Prozessierung und dem nukleären Export koppelt, indem er die ko-transkriptionelle Assemblierung von Messenger-Ribonukleoprotein-Komplexen (mRNPs) koordiniert. Über Interaktionen mit der RNA-Polymerase II und Exportfaktoren unterstützt THOC1 die genomweite Reifung von Transkripten, bewahrt die R‑Loop-Homöostase und trägt zur Aufrechterhaltung der Integrität von Replikation und Transkription bei. Eine Störung des THOC1-abhängigen RNA-Exports kann den Zellzyklusverlauf und Stressantworten beeinträchtigen und verknüpft diesen Faktor damit mit Signalwegen, die die Genomstabilität beeinflussen. Veränderte THOC1-Expression und eine Dysfunktion des TREX-Komplexes wurden in mehreren krebsbezogenen Kontexten sowie in Studien zu Störungen des RNA-Stoffwechsels beobachtet, was THOC1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Untersuchungen macht.

Das THOC1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des THOC1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des THOC1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von THOC1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die THOC1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von THOC1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der THOC1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf THOC1-Exone abzielen, die für die THOC1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere THOC1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom THOC1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom THOC1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des THOC1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das THOC1 HDR-Plasmid (h) und THOC1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von THOC1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten THOC1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.