THOC1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403390-ACT

THOC1 kodiert eine zentrale Untereinheit des THO/TREX-Komplexes, der die Transkription durch RNA-Polymerase II mit der prä-mRNA-Verarbeitung und dem Export von mRNA durch die Kernpore koppelt. Durch die Koordination der Assemblierung von Messenger-Ribonukleoprotein-Partikeln (mRNP) unterstützt THOC1 die Integrität des Transkriptoms, begrenzt die Anreicherung von R-Loops und trägt während der Replikation sowie bei DNA-Schadensantworten zur Genomstabilität bei. Störungen von THO/TREX-Komponenten wurden mit transkriptionsassoziierter genomischer Instabilität und veränderten Expressionsprogrammen in Verbindung gebracht, die häufig in der Krebsbiologie und anderen proliferativen oder stressresponsiven Kontexten untersucht werden. Humanes THOC1 wird daher breit als mechanistischer Einstiegspunkt genutzt, um die Kopplung von Transkription und Export, RNA-Überwachung sowie chromatinassoziierte RNA-Prozessierung zu untersuchen.

THOC1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen THOC1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

THOC1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des THOC1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der THOC1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen THOC1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native THOC1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von THOC1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des THOC1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem THOC1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.