TGIF Lentiviral Activation Particles (h): sc-401472-LAC

Das humane TGIF1-Gen kodiert TGIF, einen TALE-Homeobox-Transkriptionscorepressor, der Genexpressionsprogramme während der Entwicklung und der Gewebehomöostase moduliert. TGIF ist in die TGF-β/SMAD-Signalübertragung eingebunden, indem es an SMAD2/3-Komplexe bindet und Corepressor-Maschinerie rekrutiert, um transkriptionelle Antworten feinzujustieren; dadurch beeinflusst es Zellschicksalsentscheidungen, die epithelial-mesenchymale Transition und Differenzierung. Zudem greift es in retinsäureabhängige Transkriptionsnetzwerke sowie in umfassendere chromatinregulatorische Prozesse ein, die die Morphogenese prägen. Eine fehlregulierte TGIF1-Aktivität oder -Expression wurde mit angeborenen Entwicklungsphänotypen in Verbindung gebracht und im Kontext onkogener transkriptioneller Umprogrammierung sowie einer aberranten TGF-β-Signalweg-Ausgabe untersucht.

TGIF Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente TGIF1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

TGIF Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der TGIF1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen TGIF-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen TGIF1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.