Plásmido CRISPR de Activación (h2) TGF beta Receptor 3/TGFBR3: sc-401316-ACT-2

El TGFBR3 humano (receptor de TGF‑β tipo III; betaglicano) es un proteoglicano de membrana que funciona como correceptor, regulando la presentación de ligandos y la especificidad de la señalización dentro de la superfamilia del TGF‑β, incluidos los TGF‑β y ciertas BMP. Al modular el ensamblaje de los complejos receptores y la disponibilidad de ligandos en la superficie celular, TGFBR3 influye tanto en programas transcripcionales dependientes de SMAD como en vías no canónicas asociadas con la transición epitelio‑mesénquima, la remodelación de la matriz extracelular y la migración celular. La alteración de la expresión de TGFBR3 o de su liberación por desprendimiento (shedding) se ha implicado en la desregulación de la señalización de TGF‑β observada en la fibrosis y en cambios del microambiente asociados al cáncer, lo que lo convierte en una diana útil para estudios mecanísticos. Los reactivos para TGFBR3 permiten investigar el diálogo entre vías, el tráfico de receptores y el shedding del ectodominio, así como respuestas específicas del contexto celular en modelos de células humanas.

TGF beta Receptor 3/TGFBR3 El plásmido de activación CRISPR (h2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TGFBR3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TGF beta Receptor 3/TGFBR3 El plásmido de activación CRISPR (h2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TGFBR3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TGFBR3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TGF beta Receptor 3/TGFBR3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TGFBR3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TGF beta Receptor 3/TGFBR3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TGF beta Receptor 3/TGFBR3 en células tumorales con expresión de TGFBR3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.