Plásmido Doble Nickase (h) TGF beta Receptor 1/TGFBR1: sc-400153-NIC

TGFBR1 codifica el receptor tipo I del factor de crecimiento transformante beta (ALK5), una quinasa de serina/treonina que se asocia con TGFBR2 para transducir ligandos de TGF-β en señalización intracelular. Tras su activación, TGFBR1 fosforila a SMAD2/3 para impulsar programas transcripcionales dependientes de SMAD y también se conecta con vías no canónicas, incluidas MAPK, PI3K/AKT y la señalización de GTPasas tipo Rho, modulando el control del ciclo celular, la diferenciación, la regulación inmunitaria y la remodelación de la matriz extracelular. La alteración de la señalización de TGFBR1 se relaciona con cambios en la transición epitelio-mesenquimal, estados transcripcionales asociados a la fibrosis y un control del crecimiento desregulado observado en trastornos del desarrollo y en la biología del cáncer. Como nodo central de la señalización de TGF-β, TGFBR1 se analiza con frecuencia para cartografiar el cableado de la vía dependiente del contexto y la integración de señales próximas al receptor.

TGF beta Receptor 1/TGFBR1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TGFBR1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TGFBR1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TGFBR1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TGFBR1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.