TGF beta Receptor 1/TGFBR1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400153-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TGF beta Receptor 1/TGFBR1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TGF beta Receptor 1/TGFBR1 Double-Nickase-Plasmid (h) und TGF beta Receptor 1/TGFBR1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TGFBR1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TGF beta Receptor 1/TGFBR1: sc-518018
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TGF beta Receptor 1/TGFBR1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400153-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TGF beta Receptor 1/TGFBR1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400153-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TGFBR1 kodiert den Transforming-Growth-Factor‑beta‑Rezeptor Typ I (ALK5), eine Serin/Threonin-Kinase, die mit TGFBR2 zusammenwirkt, um TGF‑β‑Liganden in intrazelluläre Signale zu übersetzen. Nach Aktivierung phosphoryliert TGFBR1 SMAD2/3 und steuert damit SMAD-abhängige Transkriptionsprogramme; zudem koppelt er an nicht-kanonische Signalwege wie MAPK, PI3K/AKT und Rho-ähnliche GTPase-Signalgebung, wodurch Zellzykluskontrolle, Differenzierung, Immunregulation und Umbau der extrazellulären Matrix geprägt werden. Störungen der TGFBR1-Signalübertragung stehen mit veränderter epithelial–mesenchymaler Transition, fibrosisassoziierten Transkriptionszuständen und einer dysregulierten Wachstumskontrolle in Zusammenhang, wie sie in Entwicklungsstörungen und der Krebsbiologie beobachtet werden. Als zentraler Knotenpunkt der TGF‑β-Signalgebung wird TGFBR1 häufig untersucht, um kontextspezifische Verschaltungen des Signalwegs und die rezeptornahe Signalintegration zu kartieren.
TGF beta Receptor 1/TGFBR1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TGFBR1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TGFBR1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TGFBR1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TGFBR1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.