TGFβ2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423367
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- TGFβ2 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im TGFβ2-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TGFβ2: sc-374659
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TGFβ2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-423367 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Tgfb2 kodiert den Transforming Growth Factor Beta 2 (TGFβ2), ein sezerniertes Zytokin, das über TGFβ-Rezeptoren signalisiert, um SMAD2/3-abhängige Transkriptionsprogramme zu aktivieren, und das mit nicht-kanonischen Signalwegen interagiert, darunter MAPK, PI3K/AKT und Rho-GTPasen. In Mausgeweben trägt TGFβ2 zur Regulation der Ablagerung extrazellulärer Matrix, der Zellproliferation und -differenzierung, der epithelial–mesenchymalen Transition sowie zur Immunmodulation innerhalb des Gewebemikromilieus bei. Eine fehlregulierte TGFβ2-Signalübertragung ist mit pathologischer Fibrose, veränderter Angiogenese und Verschiebungen des Entzündungstonus verbunden, was für Entwicklungsstörungen und die Tumorbiologie relevant ist. Da die Effekte des Signalwegs stark kontextabhängig sind, wird Tgfb2 häufig untersucht, um zu klären, wie lokale TGFβ-Signale Zellschicksal und stromales Remodeling beeinflussen.
Das TGFβ2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tgfb2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tgfb2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tgfb2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TGFβ2-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tgfb2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TGFβ2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Tgfb2-Exone abzielen, die für die TGFβ2-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tgfb2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom TGFβ2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TGFβ2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tgfb2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TGFβ2 HDR-Plasmid (m) und TGFβ2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tgfb2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tgfb2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.