Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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TGF beta 1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400067-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TGF beta 1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TGF beta 1 Double-Nickase-Plasmid (h) und TGF beta 1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TGFB1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TGF beta 1: sc-130348
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TGF beta 1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400067-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TGF beta 1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400067-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TGFB1 kodiert den Transforming Growth Factor Beta 1 (TGF‑β1), ein sezerniertes Zytokin, das über TGFBR1/2 signalisiert, um eine SMAD2/3‑abhängige Transkription zu aktivieren, und dabei mit MAPK-, PI3K/AKT- und Rho‑GTPase‑Signalwegen interagiert. Es ist ein zentraler Regulator des Umbaus der extrazellulären Matrix, der epithelial‑mesenchymalen Transition, der Immunsuppression und von Wundheilungsprogrammen und beeinflusst je nach Kontext Zellzyklusarrest und Differenzierung. Eine fehlregulierte TGF‑β1‑Signalgebung ist an fibrotischen Erkrankungen, der Umgestaltung des Tumormikromilieus und fehlgeleiteter Entzündung beteiligt, wodurch TGFB1 ein häufiger Knotenpunkt für die Untersuchung des Crosstalks zwischen stromalen und Immun‑Kompartimenten ist.
TGF beta 1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TGFB1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TGFB1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TGFB1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TGFB1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.