TGase1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401487-ACT

Das humane **TGM1**-Gen kodiert **Transglutaminase 1 (TGase1)**, ein Ca2+-abhängiges Enzym, das während der terminalen Keratinozytendifferenzierung ε-(γ-Glutamyl)Lysin-Quervernetzungen zwischen Strukturproteinen katalysiert. TGase1 ist eine zentrale Komponente beim Aufbau der kornifizierten Hülle der Epidermis und integriert Signale aus Programmen der Keratinisierung und Barrierebildung, um das Stratum corneum zu stabilisieren. Seine Aktivität verknüpft differenzierungsabhängige Veränderungen der Substratverfügbarkeit mit der Kalziumsignalgebung und der Proteostase in den oberen Epidermisschichten. Eine dysregulierte TGM1-Funktion steht in Zusammenhang mit erblichen Störungen der Hautbarriere und abnormer Kornifizierung, was TGM1 zu einem nützlichen Marker und mechanistischen Knotenpunkt für die Untersuchung der epidermalen Differenzierung und Barrierebiologie macht.

TGase1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TGM1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TGase1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TGM1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TGM1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TGase1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TGM1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TGase1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TGase1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TGM1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.