TFPI-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-417987
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- TFPI-2 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im TFPI-2-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TFPI-2: sc-48380
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TFPI-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-417987 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
TFPI2 kodiert den Tissue-Factor-Pathway-Inhibitor 2 (TFPI-2), einen sezernierten Kunitz-Typ-Serinproteaseinhibitor, der die perizelluläre Proteolyse innerhalb der extrazellulären Matrix moduliert. Durch die Hemmung von Proteasen, die am Matrixumbau und an gerinnungsassoziierter Proteaseaktivität beteiligt sind, beeinflusst TFPI-2 Zelladhäsion, Migration, Invasion und die Gewebehomöostase. Die TFPI-2-Aktivität greift in extrazelluläre Proteasenetzwerke ein, die mit der Regulation von Matrixmetalloproteinasen und thrombinbezogener Signalübertragung verknüpft sind, und prägt so das Gleichgewicht zwischen proteolytischer Aktivierung und Hemmung im Tumormikromilieu sowie in vaskulären Kontexten. Eine fehlregulierte TFPI2-Expression wurde in mehreren krankheitsrelevanten Modellen mit einem abnormen Umsatz der extrazellulären Matrix und veränderten invasiven Phänotypen in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als mechanistischer Knotenpunkt in Studien zu metastasebezogenen Prozessen unterstützt.
Das TFPI-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TFPI2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TFPI2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TFPI2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TFPI-2-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TFPI2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TFPI-2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf TFPI2-Exone abzielen, die für die TFPI-2-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere TFPI2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom TFPI-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TFPI-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TFPI2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TFPI-2 HDR-Plasmid (h) und TFPI-2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TFPI2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TFPI2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.