Plásmido Doble Nickase (h) TFIIIC220: sc-404920-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)TFIIIC220 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa TFIIIC220 (h) y el plásmido de doble nickasa TFIIIC220 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GTF3C1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TFIIIC220 Anticuerpo (F-12): sc-398780
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) TFIIIC220 | sc-404920-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) TFIIIC220 | sc-404920-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GTF3C1 codifica TFIIIC220, la subunidad más grande del complejo TFIIIC, que reconoce elementos promotores internos en genes transcritos por la ARN polimerasa III, incluidos los ARNt y otros ARN pequeños no codificantes. Mediante la unión al promotor y el reclutamiento de TFIIIB, TFIIIC220 favorece el ensamblaje del complejo de preiniciación de la Pol III y regula la producción transcripcional vinculada a la capacidad de traducción, la adaptación al estrés y la progresión del ciclo celular. TFIIIC también contribuye a la organización genómica de orden superior al asociarse con la cromatina y con elementos de frontera, conectando la transcripción por Pol III con la arquitectura nuclear. La desregulación del control transcripcional de la Pol III y de la función de TFIIIC se investiga con frecuencia en contextos de programas de proliferación alterados, estabilidad genómica y reconfiguración transcripcional observados en modelos de cáncer y enfermedades del desarrollo.
TFIIIC220 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GTF3C1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GTF3C1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GTF3C1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GTF3C1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.