TFIIH p62 Double Nickase Plasmid (h): sc-402239-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TFIIH p62 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TFIIH p62 Double-Nickase-Plasmid (h) und TFIIH p62 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GTF2H1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TFIIH p62: sc-25329
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TFIIH p62 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402239-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TFIIH p62 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402239-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GTF2H1 kodiert TFIIH p62, eine essenzielle Untereinheit des TFIIH-Komplexes, der die Initiation der Transkription durch die RNA-Polymerase II mit der Nukleotid-Exzisionsreparatur koppelt. Über Wechselwirkungen mit anderen TFIIH-Komponenten trägt p62 zur Öffnung des Promotors bei und unterstützt die Überprüfung von DNA-Schäden sowie die Reparatur während der globalen Genom-NER und der transkriptionsgekoppelten NER. Diese Funktionen sind in die zentrale transkriptionelle Regulation, die Signalwege der DNA-Schadensantwort und die Aufrechterhaltung der Genomstabilität eingebunden. Störungen der TFIIH-Aktivität werden mit Erkrankungen in Verbindung gebracht, die durch defekte DNA-Reparatur und eine Fehlregulation der Transkription gekennzeichnet sind, darunter Syndrome aus dem Xeroderma-pigmentosum–Cockayne-Spektrum sowie die Trichothiodystrophie.
TFIIH p62 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GTF2H1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GTF2H1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GTF2H1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GTF2H1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.