Plásmido Doble Nickase (h) TFIIH p62: sc-402239-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)TFIIH p62 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa TFIIH p62 (h) y el plásmido de doble nickasa TFIIH p62 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GTF2H1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TFIIH p62 Anticuerpo (H-10): sc-25329
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) TFIIH p62 | sc-402239-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) TFIIH p62 | sc-402239-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GTF2H1 codifica TFIIH p62, una subunidad esencial del complejo TFIIH que acopla el inicio de la transcripción por la ARN polimerasa II con la reparación por escisión de nucleótidos. Mediante interacciones con otros componentes de TFIIH, p62 contribuye a la apertura del promotor y apoya la verificación del daño en el ADN y su reparación durante la NER del genoma global y la NER acoplada a la transcripción. Estas funciones se integran con el control transcripcional básico, la señalización de la respuesta al daño en el ADN y el mantenimiento de la estabilidad genómica. La alteración de la actividad de TFIIH está implicada en trastornos caracterizados por una reparación del ADN defectuosa y desregulación transcripcional, incluidos síndromes dentro del espectro xeroderma pigmentoso–Cockayne y la tricotiodistrofia.
TFIIH p62 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GTF2H1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GTF2H1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GTF2H1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GTF2H1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.