Plasmide CRISPR d'Activation (h) TFII-I: sc-403153-ACT

GTF2I code pour TFII-I, un facteur de transcription multifonctionnel qui se lie à des éléments initiateurs et de type E-box afin d’intégrer des signaux proximaux aux récepteurs aux programmes d’expression génique dépendants de l’ARN polymérase II. TFII-I participe à des réseaux de signalisation des facteurs de croissance et de l’immunité, en modulant des voies liées à l’activité MAPK/ERK, à la transcription dépendante du calcium et à la régulation de la chromatine sensible aux stimuli. Par ses rôles dans le contrôle de la prolifération, de la différenciation et des réponses au stress, TFII-I a été étudié dans le contexte de phénotypes neurodéveloppementaux et de dérégulations immunitaires, notamment en lien avec des altérations génomiques dosage-sensibles en 7q11.23. Une régulation altérée de GTF2I offre aussi un point d’entrée mécanistique pour étudier le recâblage transcriptionnel dans la signalisation associée au cancer et les transitions d’état cellulaire.

TFII-I Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GTF2I sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TFII-I Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GTF2I dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GTF2I, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TFII-I. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GTF2I natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TFII-I au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TFII-I dans les cellules tumorales présentant une expression de GTF2I silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.