TF Lentiviral Activation Particles (m2): sc-420268-LAC-2

Das Mausgen F3 kodiert den Tissue Factor (TF), einen transmembranären Initiator der extrinsischen Gerinnungskaskade, der Faktor VII/VIIa bindet und dadurch die nachgeschaltete Aktivierung von Faktor X sowie die Thrombinbildung fördert. Über die Hämostase hinaus ist die TF-Signalgebung mit proteaseaktivierten Rezeptor(PAR)-abhängigen Signalwegen verknüpft und beeinflusst in endothelialen und myeloiden Kontexten Entzündung, vaskuläres Remodeling und Zellmigration. Eine dysregulierte F3/TF-Expression ist an pathologischer Thrombose, sepsisassoziierter Koagulopathie und tumorassoziierter prokoagulatorischer Aktivität beteiligt und stellt damit einen zentralen Knotenpunkt dar, der Gerinnung und angeborene Immunantworten verbindet. Das Gene Editing von murinem F3 ermöglicht mechanistische Untersuchungen zur Assemblierung von Gerinnungsfaktoren, zur TF-getriebenen PAR-Signalgebung sowie zu In-vivo-Modellen, die thromboinflammatorische Phänotypen und Reaktionen auf Gefäßverletzungen bewerten.

TF Lentivirale Aktivierungspartikel (m2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente F3-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

TF Lentivirale Aktivierungspartikel (m2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der F3-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen TF-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen F3-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.