TET1 Lentiviral Activation Particles (h2): sc-400845-LAC-2

Das humane TET1 (ten-eleven translocation 1) kodiert eine Fe(II)-/2‑Oxoglutarat‑abhängige Dioxygenase, die die schrittweise Oxidation von 5‑Methylcytosin zu 5‑Hydroxymethylcytosin und weiteren oxidierten Derivaten katalysiert und dadurch aktive DNA‑Demethylierung sowie epigenetisches Remodelling fördert. Die TET1‑Aktivität prägt Transkriptionsprogramme über die Regulation der CpG‑Insel‑Methylierung, der Enhancer‑Dynamik und des Chromatinzustands und ist dabei mit DNA‑Reparatur sowie der replikationsgekoppelten Aufrechterhaltung der Genomintegrität verknüpft. Eine dysregulierte TET1‑Expression oder ‑Funktion steht mit den aberranten DNA‑Methylierungslandschaften in Verbindung, die in Krebs sowie in neuroentwicklungsbezogenen und neurodegenerativen Kontexten beobachtet werden, und macht TET1 zu einem zentralen Knotenpunkt in Studien zur Stabilität des Epigenoms. Geneditierung von TET1 ermöglicht die mechanistische Aufklärung des DNA‑Methylierungsumsatzes, der Linienfestlegung und Pluripotenz‑Netzwerke sowie die funktionelle Kartierung methylierungssensitiver regulatorischer Elemente in humanen Zellmodellen.

TET1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente TET1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

TET1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der TET1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen TET1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen TET1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.