Plasmide CRISPR/Cas9 KO Tenascin-R (m): sc-423465

Présentation

Tnr code la ténascine‑R, une glycoprotéine de la matrice extracellulaire enrichie dans le système nerveux central, qui module les interactions cellule–cellule et cellule–matrice au cours du développement neural et de la maturation des circuits. La ténascine‑R contribue à la croissance des neurites, au guidage axonal, à la stabilisation synaptique et à la myélinisation, notamment via des interactions avec des molécules d’adhésion et des protéoglycanes qui façonnent le réseau périneuronal. En influençant la signalisation extracellulaire et la plasticité structurelle, elle affecte des processus tels que la connectivité neuronale et le remodelage dépendant de l’activité. Des altérations de la fonction ou de l’expression de la ténascine‑R ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude, dans des modèles murins, des mécanismes sous‑tendant l’organisation synaptique et l’excitabilité des réseaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Tenascin-R (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tnr dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tnr, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tnr à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Tenascin-R.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tnr pour l'étude de la signalisation de Tenascin-R, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tnr essentiels à la fonction de Tenascin-R
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tnr pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Tenascin-R plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Tenascin-R plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tnr. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Tenascin-R plasmide HDR (m) et le Tenascin-R (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tnr pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tnr définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.