Tenascin-C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423430

Übersicht

Tnc kodiert das extrazelluläre Matrixglykoprotein Tenascin‑C, ein streng reguliertes matrizelluläres Protein, das während der Entwicklung, der Gewebeumgestaltung und bei Entzündungen Zell‑Matrix‑Interaktionen moduliert. Tenascin‑C beeinflusst Adhäsion und Migration durch die Interaktion mit Integrinen, Fibronectin und Proteoglykanen und feinjustiert die Mechanotransduktion sowie die Wachstumsfaktor‑Signalgebung innerhalb der stromalen Nische. Es wird häufig durch verletzungsassoziierte Signale induziert und ist an Prozessen wie epithelial‑mesenchymalen Transitionen, angiogenem Remodeling und der Rekrutierung von Leukozyten beteiligt. Eine fehlregulierte Tenascin‑C‑Expression wurde mit Fibrose, chronisch entzündlichen Mikroumgebungen und tumorassoziiertem stromalem Remodeling in Verbindung gebracht, was Tnc zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung extrazellulärmatrix‑getriebener Signalprogramme macht.

Das Tenascin-C CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tnc-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tnc-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tnc nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Tenascin-C-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tnc-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Tenascin-C-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tnc-Exone abzielen, die für die Tenascin-C-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tnc-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Tenascin-C CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Tenascin-C CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tnc-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Tenascin-C HDR-Plasmid (m) und Tenascin-C HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tnc-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tnc-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.