Plasmide CRISPR/Cas9 KO TEM5 (h): sc-407178

Présentation

ADGRA2 (TEM5) code un récepteur couplé aux protéines G de type « adhesion » doté d’une vaste région extracellulaire, qui favorise les interactions cellule–cellule et cellule–matrice et relie les signaux extracellulaires à la signalisation intracellulaire. En tant que membre de la famille des GPCR d’adhésion, TEM5 est associé à des processus tels que le comportement des cellules endothéliales, le remodelage vasculaire et tissulaire, et la régulation de l’organisation du cytosquelette via des voies dépendantes des GPCR. L’expression de TEM5 a été rapportée dans des contextes liés à la vascularisation associée aux tumeurs et au remodelage du stroma, ce qui en fait une cible d’intérêt pour l’étude de la signalisation angiogénique et de la régulation du microenvironnement. L’étude fonctionnelle d’ADGRA2 peut aider à préciser comment la signalisation des GPCR d’adhésion intègre la dynamique d’adhésion extracellulaire avec des réponses transcriptionnelles et cytosquelettiques dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TEM5 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ADGRA2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ADGRA2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ADGRA2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TEM5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ADGRA2 pour l'étude de la signalisation de TEM5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ADGRA2 essentiels à la fonction de TEM5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ADGRA2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TEM5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TEM5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ADGRA2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TEM5 plasmide HDR (h) et le TEM5 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ADGRA2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ADGRA2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.