Telethonin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402317-ACT

TCAPはテレトニン（telethonin）をコードしており、テレトニンはサルコメアのZディスクに存在するタンパク質で、タイチン（TTN）のN末端に結合し、横紋筋における筋原線維の組み立てや力学的カップリングの安定化に寄与します。テレトニンはサルコメアの構造維持と、メカノトランスダクション（機械刺激のシグナル伝達）に関連するシグナル伝達に関与し、筋の発生や適応の過程でZディスクにおけるタンパク質複合体の編成を調整します。TCAPの発現量やテレトニンの機能の破綻は、遺伝性の心筋症や骨格筋疾患と関連づけられており、Zディスクタンパク質の量的バランス（ストイキオメトリー）に対して収縮装置の構造が敏感であることを示しています。タイチンを中心とした複合体形成の要となる分子として、テレトニンは細胞骨格の編成、筋線維の維持、ストレス応答性リモデリングを制御する経路で頻繁に研究されています。

Telethonin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TCAPの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Telethonin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TCAP 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTCAP転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Telethoninの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTCAP遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTelethonin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTCAP発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTelethonin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。