TEF-5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423328

Übersicht

Tead3 kodiert TEF-5, einen Transkriptionsfaktor mit TEA/ATTS-Domäne, der mit Koaktivatoren wie YAP/TAZ zusammenwirkt, um enhancergetriebene Genexpressionsprogramme zu regulieren, die Zellproliferation, Überleben und die Festlegung von Zellschicksalen steuern. In der Maus trägt TEF-5 zur Entwicklungsmusterung und zum Organwachstum bei, indem es Signale des Hippo-Signalwegs mit kontextabhängigen transkriptionellen Outputs integriert. Die Aktivität der TEAD-Familie wird breit mit Mechanotransduktion sowie Stamm-/Vorläuferzellzuständen in Verbindung gebracht, was Tead3 zu einem relevanten Knotenpunkt für die Untersuchung von Wachstumskontrolle und Gewebehomöostase macht. Eine dysregulierte TEAD–YAP/TAZ-Transkriptionsschaltung ist in mehreren Modellsystemen mit tumorigenen Phänotypen und aberranter Regeneration assoziiert, was ihren Einsatz in der Signalweg- und Krankheitsmechanismusforschung unterstützt.

Das TEF-5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tead3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tead3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tead3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TEF-5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tead3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TEF-5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tead3-Exone abzielen, die für die TEF-5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tead3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TEF-5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TEF-5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tead3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TEF-5 HDR-Plasmid (m) und TEF-5 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tead3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tead3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.