TEF-4 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402319-ACT

Das humane Gen **TEAD2** kodiert den Transkriptionsfaktor **TEF-4**, ein DNA-bindendes Protein mit TEA/ATTS-Domäne, das mit **YAP/TAZ** kooperiert, um Genprogramme zu steuern, die Proliferation, Überleben und Linienfestlegung regulieren. TEF-4 integriert Signale aus dem Hippo-Signalweg und koordiniert Enhancer- und Promotoraktivität, um die Zellzyklusprogression, die Zytoskelettdynamik und die epithelial–mesenchymale Plastizität zu regulieren. Eine dysregulierte TEAD2/TEF-4-Aktivität wurde mit aberranter Wachstumskontrolle und veränderten Differenzierungszuständen in verschiedenen Tumorkontexten sowie bei Entwicklungsstörungen in Verbindung gebracht, was TEAD2/TEF-4 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Analyse von Abhängigkeiten transkriptioneller Schaltkreise macht. Als Effektor des Signalwegs bietet TEF-4 einen gut handhabbaren Ansatzpunkt, um zu untersuchen, wie upstream liegende mechanische und Kinase-Signale in Zellzustandsübergänge übersetzt werden.

TEF-4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TEAD2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TEF-4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TEAD2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TEAD2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TEF-4-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TEAD2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TEF-4-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TEF-4-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TEAD2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.