TECK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422841

Übersicht

Ccl25 kodiert das im Thymus exprimierte Chemokin TECK (thymus-expressed chemokine), ein CC‑Chemokin, das vor allem über CCR9 signalisiert, um die chemotaktische Migration und Positionierung von CCR9+ Leukozyten zu steuern. Bei der Maus trägt TECK zum Trafficking von Immunzellen in thymischen Mikroumgebungen und mukosalen Geweben bei und prägt so das Homing von Lymphozyten, die Gewebeüberwachung und die regionale Immunorganisation. Die nachgeschaltete Signalübertragung aktiviert GPCR‑abhängige Signalwege, darunter PI3K/AKT‑ und MAPK‑Kaskaden, die Motilität, Adhäsion und die Umgestaltung des Zytoskeletts regulieren. Eine dysregulierte Aktivität der Ccl25–CCR9‑Achse wird mit entzündlicher Immunzellinfiltration und veränderter Lymphozytenlokalisation in Verbindung gebracht, was für Modelle mukosaler Entzündungen und der tumorassoziierten Verteilung von Immunzellen relevant ist.

Das TECK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ccl25-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ccl25-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ccl25 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TECK-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ccl25-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TECK-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ccl25-Exone abzielen, die für die TECK-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ccl25-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TECK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TECK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ccl25-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TECK HDR-Plasmid (m) und TECK HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ccl25-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ccl25-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.