Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
TdT Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423324
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- TdT El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico TdT, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TdT Anticuerpo (C-11): sc-393710
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
TdT Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423324 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
La DNA nucleotidiltransferasa terminal (Dntt) codifica la transferasa terminal de desoxinucleótidos (TdT), una polimerasa de ADN independiente de molde que añade nucleótidos no templados a las uniones de recombinación V(D)J para generar diversidad en la región N. La TdT actúa en linfocitos en desarrollo durante el ensamblaje de los genes de los receptores de antígeno, influyendo en la amplitud del repertorio mediante la modulación de los resultados de la unión de extremos y del procesamiento de las uniones. Su actividad se entrecruza con la reparación de roturas de doble cadena del ADN y con factores de la unión de extremos no homóloga (NHEJ) que resuelven los intermediarios de recombinación. La expresión desregulada de Dntt o una actividad aberrante de TdT se utiliza ampliamente como característica molecular de estados linfoides inmaduros y es relevante para estudios mecanísticos del desarrollo linfoide y de la integridad genómica durante la recombinación.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO TdT (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Dntt en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Dntt junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Dntt tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TdT.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Dntt para la investigación de la señalización de TdT, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Dntt críticos para la función de TdT
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Dntt para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido TdT CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TdT CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Dntt. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TdT (m) y el plásmido HDR TdT (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Dntt para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Dntt definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.