TdT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406822

Übersicht

DNTT kodiert die terminale Desoxynukleotidyl-Transferase (TdT), eine spezialisierte DNA-Polymerase, die während der Lymphozytenentwicklung nicht vorlagengeleitete Nukleotide an Zwischenprodukte der V(D)J-Rekombination anfügt. Durch die Erhöhung der junctionalen Diversität an Immunglobulin- und T‑Zellrezeptor-Loci prägt TdT die Antigenrezeptor-Repertoires und trägt zur Spezifität der adaptiven Immunantwort bei. Die TdT-Aktivität ist eng mit Reparaturprozessen von DNA-Doppelstrangbrüchen und End-Joining-Ereignissen an Rekombinationssignal-Sequenzen verknüpft. Eine aberrante DNTT-Expression wird breit als Marker unreifer lymphoider Zustände genutzt und häufig im Kontext von Leukemogenese, genomischer Instabilität und Linienspezifikation untersucht.

Das TdT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DNTT-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DNTT-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DNTT nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TdT-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DNTT-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TdT-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DNTT-Exone abzielen, die für die TdT-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DNTT-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TdT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TdT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DNTT-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TdT HDR-Plasmid (h) und TdT HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DNTT-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DNTT-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.