Plasmide CRISPR/Cas9 KO TDRD1 (h): sc-410043

Présentation

TDRD1 (Tudor domain containing 1) est une protéine de liaison à l’ARN enrichie dans la lignée germinale, qui reconnaît des résidus d’arginine diméthylés de façon symétrique sur les protéines de la famille PIWI et favorise l’assemblage de la voie des piRNA. Grâce à ces interactions, TDRD1 contribue au silençage des transposons, au maintien de l’intégrité du génome et au bon déroulement de la spermatogenèse en coordonnant la biogenèse des piRNA et l’organisation des granules germinaux. La perturbation de la surveillance des piRNA dépendante de TDRD1 est associée à des défauts du développement des cellules germinales mâles et à des phénotypes de fertilité altérée, reflétant son rôle central dans la protection du génome germinal. Une expression modifiée et des programmes germinaux dérégulés impliquant TDRD1 ont également été étudiés dans le contexte de la biologie des antigènes cancer-testis et de la dérégulation épigénétique dans les tumeurs.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TDRD1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TDRD1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TDRD1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TDRD1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TDRD1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TDRD1 pour l'étude de la signalisation de TDRD1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TDRD1 essentiels à la fonction de TDRD1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TDRD1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TDRD1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TDRD1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TDRD1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TDRD1 plasmide HDR (h) et le TDRD1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TDRD1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TDRD1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.