TDRD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-410043

Übersicht

TDRD1 (Tudor-Domäne enthaltend 1) ist ein in der Keimbahn angereichertes RNA-bindendes Protein, das symmetrisch dimethylierte Argininreste auf Proteinen der PIWI-Familie erkennt und den Aufbau des piRNA-Signalwegs unterstützt. Über diese Interaktionen trägt TDRD1 zur Stilllegung von Transposons, zur Aufrechterhaltung der Genomintegrität und zum korrekten Ablauf der Spermatogenese bei, indem es die piRNA-Biogenese und die Organisation von Keimgranula koordiniert. Eine Störung der TDRD1-abhängigen piRNA-Überwachung wird mit Defekten in der Entwicklung männlicher Keimzellen und eingeschränkter Fertilität in Verbindung gebracht und spiegelt seine zentrale Rolle beim Schutz des Keimbahn-Genoms wider. Eine veränderte Expression sowie fehlregulierte Keimbahnprogramme unter Beteiligung von TDRD1 wurden außerdem im Kontext der Cancer-Testis-Antigen-Biologie und epigenetischer Deregulation in Tumoren untersucht.

Das TDRD1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TDRD1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TDRD1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TDRD1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TDRD1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TDRD1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TDRD1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TDRD1-Exone abzielen, die für die TDRD1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TDRD1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TDRD1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TDRD1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TDRD1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TDRD1 HDR-Plasmid (h) und TDRD1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TDRD1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TDRD1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.