TCF7L2/TCF4 Lentiviral Activation Particles (h): sc-400607-LAC

TCF7L2 (auch als TCF4 bekannt) kodiert einen Transkriptionsfaktor mit High-Mobility-Group-(HMG)-Box, der als zentraler nukleärer Effektor der kanonischen Wnt/β-Catenin-Signalübertragung fungiert. Durch die Zusammenarbeit mit β-Catenin und Koregulatoren steuert TCF7L2 kontextabhängige Transkriptionsprogramme, die die Festlegung von Zellschicksalen, die Proliferation und die Expression metabolischer Gene in zahlreichen Geweben regulieren. Sein regulatorisches Netzwerk überschneidet sich mit Chromatin-Remodeling und Enhancer-Aktivität und prägt so Linienentscheidungen in epithelialen und endokrinen Kompartimenten. Genetische und expressionsbezogene Störungen von TCF7L2 sind stark mit veränderter Glukosehomöostase und einem erhöhten Risiko für Typ-2-Diabetes assoziiert; zudem wird eine fehlregulierte Wnt-abhängige Transkription unter Beteiligung von TCF7L2 in der Tumorentstehung sowie in der Entwicklungsbiologie untersucht.

TCF7L2/TCF4 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente TCF7L2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

TCF7L2/TCF4 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der TCF7L2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen TCF7L2/TCF4-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen TCF7L2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.