TBZF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-417474

Übersicht

ZNF675 kodiert das humane Protein TBZF, einen mutmaßlichen Zinkfinger-DNA-bindenden Faktor, der an der Transkriptionsregulation und der Aufrechterhaltung zellzustandsspezifischer Genexpressionsprogramme beteiligt ist. Als wahrscheinlich nukleärer Regulator dürfte TBZF chromatinassoziierte Prozesse wie Promotor-/Enhancer-Aktivität, transkriptionelle Repression oder Aktivierung sowie die Koordination nachgeschalteter, signalantwortabhängiger Gennetzwerke beeinflussen. Eine Fehlregulation von Zinkfinger-Transkriptionsfaktoren ist häufig mit veränderter Differenzierung, Proliferation und Stressantwort-Signalwegen verbunden, wodurch ZNF675 ein relevantes Ziel für mechanistische Studien zur Kontrolle der Genregulation in krankheitsassoziierten zellulären Phänotypen darstellt. Die Untersuchung der TBZF-Funktion kann dazu beitragen zu klären, wie sich transkriptionelle Schaltkreise mit übergeordneten Signalwegen integrieren, die die Genomstabilität und die zelluläre Homöostase steuern.

Das TBZF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ZNF675-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ZNF675-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ZNF675 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TBZF-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ZNF675-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TBZF-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ZNF675-Exone abzielen, die für die TBZF-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ZNF675-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TBZF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TBZF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ZNF675-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TBZF HDR-Plasmid (h) und TBZF HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ZNF675-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ZNF675-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.