TBX4 Double Nickase Plasmid (h): sc-405242-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TBX4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TBX4 Double-Nickase-Plasmid (h) und TBX4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TBX4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TBX4: sc-515196
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TBX4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405242-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TBX4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405242-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TBX4 kodiert einen Transkriptionsfaktor der T-Box-Familie, der über eine konservierte T-Box-Domäne an DNA bindet und Genexpressionsprogramme reguliert, die die embryonale mesenchymale Differenzierung, die Musterbildung der Gliedmaßen und die Organogenese steuern. In der menschlichen Entwicklung ist die TBX4-Aktivität in WNT-, BMP- und FGF-Signalnetzwerke eingebunden, um die Spezifizierung von Vorläuferzellen und die Gewebemorphogenese zu koordinieren. Eine fehlregulierte TBX4-Funktion wird mit angeborenen Entwicklungsphänotypen in Verbindung gebracht, darunter Gliedmaßenfehlbildungen und pulmonal-vaskuläre Erkrankungen, was TBX4 zu einem relevanten Ziel für die Erforschung der transkriptionellen Kontrolle von Entwicklungswegen macht. Als nukleärer Regulator stellt TBX4 einen gut untersuchbaren Knotenpunkt dar, um Enhancer-Promotor-Logik, Linienentscheidungen und nachgeschaltete Transkriptionsschaltkreise in geeigneten Zellmodellen zu analysieren.
TBX4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TBX4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TBX4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TBX4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TBX4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.