TBX15 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405994-ACT

Das humane TBX15 kodiert einen Transkriptionsfaktor der T-Box-Familie, der Programme der Entwicklungsmusterbildung sowie die Spezifizierung mesenchymaler Zelllinien reguliert und dabei insbesondere in der Biologie von Skelett- und Fettgewebe eine wichtige Rolle spielt. Durch die Bindung an T-Box-Motive und die Koordination transkriptioneller Netzwerke beeinflusst TBX15 den Chromatinzustand und nachgeschaltete Genexpressionsprogramme, die Entscheidungen über Zellschicksal, Differenzierung und Gewebemorphogenese prägen. Veränderungen der TBX15-Expression und regulatorische Varianten wurden mit der Fettverteilung und metabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht, und eine fehlregulierte TBX15-Aktivität wird in Zusammenhängen untersucht, die Entwicklungsanomalien sowie krebsassoziierte transkriptionelle Umprogrammierung betreffen. Diese Eigenschaften machen TBX15 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um die transkriptionelle Kontrolle der Linienfestlegung und die gewebespezifische Genregulation zu analysieren.

TBX15 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TBX15-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TBX15 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TBX15-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TBX15-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TBX15-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TBX15-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TBX15-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TBX15-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TBX15-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.