TARSL1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-410152-ACT

O TARS2 humano codifica uma treonil-tRNA sintetase mitocondrial necessária para o carregamento do mt-tRNA(Thr) e para manter a fidelidade da tradução mitocondrial. Ao sustentar a síntese de subunidades da fosforilação oxidativa (OXPHOS), a atividade de TARSL1/TARS2 está intimamente ligada à proteostase mitocondrial, à função da cadeia respiratória e ao metabolismo energético celular. A perturbação desse eixo pode remodelar a sinalização integrada de estresse e as vias de comunicação mitocôndria–núcleo que influenciam a proliferação e a sobrevivência. A tradução mitocondrial e a OXPHOS desreguladas são características recorrentes em fenótipos do neurodesenvolvimento e neuromusculares, bem como no metabolismo do câncer, tornando o TARS2 um nó útil para estudos mecanísticos da disfunção mitocondrial.

TARSL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TARS2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TARSL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TARS2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TARS2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TARSL1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TARS2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TARSL1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TARSL1 em células tumorais com expressão de TARS2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.