TAL2 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-423262-ACT

Das Mausgen *Tal2* kodiert den basischen Helix-Loop-Helix-Transkriptionsfaktor TAL2, einen DNA-bindenden Regulator, der über transkriptionelle Netzwerke die Festlegung von Zelllinien (Lineage Specification) und Differenzierungsprogramme beeinflusst. Die TAL2-Aktivität greift in zentrale entwicklungsbiologische genregulatorische Schaltkreise ein, in denen bHLH-Faktoren die Chromatinzugänglichkeit und Übergänge zwischen Zellzuständen koordinieren. In hämatopoetischen und neuronalen Kontexten wurde eine fehlregulierte TAL2-Expression mit abweichender transkriptioneller Kontrolle und onkogenen Genexpressionssignaturen in Verbindung gebracht, was TAL2 als mechanistischen Einstiegspunkt für die Untersuchung transformationsassoziierter Signal- und Regulationswege stützt. Als nukleärer Transkriptionsfaktor stellt TAL2 ein gut untersuchbares Modell dar, um upstream-Regulatoren, downstream-Zielgene und kontextabhängige Umverdrahtungen von Gennetzwerken zu analysieren.

TAL2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Tal2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TAL2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Tal2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Tal2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TAL2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Tal2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TAL2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TAL2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Tal2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.