Tafazzin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403588-ACT

ヒトTAZは、ミトコンドリアのリン脂質トランスアシラーゼであるタファジンをコードしており、カルジオリピンをリモデリングすることでミトコンドリア内膜の構築を維持し、酸化的リン酸化を最適化します。タファジンはカルジオリピンのアシル鎖組成を調節することにより、呼吸鎖超複合体の安定性、ミトコンドリア動態、ならびにマイトファジーに関連した品質管理を支えます。TAZを介した脂質リモデリングの破綻は、ミトコンドリア機能障害とエネルギー代謝の変容に関連し、バース症候群やそれに関連する心筋症・ミオパチー表現型との強い関連性が示されています。そのためTAZは、ミトコンドリアの生体エネルギー、レドックス恒常性、膜脂質シグナル伝達を結び付ける経路において広く研究されています。

Tafazzin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TAZの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Tafazzin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TAZ 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTAZ転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Tafazzinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTAZ遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTafazzin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTAZ発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTafazzin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。