Plasmide CRISPR/Cas9 KO TAF II p135 (h): sc-404230

Présentation

TAF4 code pour TAF II p135, une sous-unité centrale du complexe TFIID qui coopère avec la TBP et d’autres TAF pour initier la transcription dépendante de l’ARN polymérase II. Grâce à des interactions avec des facteurs de transcription spécifiques de séquence et des régulateurs associés à la chromatine, TAF II p135 contribue à la reconnaissance des promoteurs, à l’assemblage du complexe de pré-initiation et au contrôle de programmes d’expression génique dépendants de l’état cellulaire. La fonction de TAF4 est étroitement liée au remodelage de la chromatine et aux réseaux de coactivateurs transcriptionnels, ce qui l’associe à la régulation de la prolifération, de la différenciation et de la transcription en réponse au stress. Le dérèglement de l’activité de TFIID/TAF et l’altération de l’initiation de la transcription sont fréquemment étudiés dans le contexte de la reprogrammation transcriptionnelle oncogénique et d’autres troubles de la régulation de l’expression génique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TAF II p135 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TAF4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TAF4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TAF4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TAF II p135.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TAF4 pour l'étude de la signalisation de TAF II p135, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TAF4 essentiels à la fonction de TAF II p135
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TAF4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TAF II p135 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TAF II p135 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TAF4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TAF II p135 plasmide HDR (h) et le TAF II p135 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TAF4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TAF4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.