TACE/ADAM17 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400827-NIC

ADAM17（TACEとも呼ばれる）は膜に固定されたメタロプロテアーゼで、TNF、EGFRリガンド（例：TGF-α、アンフィレグリン）、ならびに複数の接着分子や受容体など、多様な細胞表面タンパク質のエクトドメイン・シェディング（細胞外ドメインの切断・遊離）を触媒します。このプロテオリシスによる処理を通じて、TACE/ADAM17は炎症シグナル、EGFR/MAPK経路の活性化、細胞間コミュニケーションを制御し、増殖・生存・免疫細胞の動員に影響を与えます。ADAM17の活性は、分泌経路での成熟化や形質膜でのトラフィッキングによって厳密に制御されており、サイトカイン、ストレス、増殖因子に対する協調的な応答に関与します。ADAM17依存的なシェディングの破綻は、慢性炎症、がん関連シグナル、心血管リモデリング、神経炎症プロセスに関与するとされ、受容体／リガンドの利用可能性や下流経路のダイナミクスを解析する機序研究において、しばしば標的として用いられます。

TACE/ADAM17 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ADAM17 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ADAM17内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ADAM17の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ADAM17が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。