TACE/ADAM17 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400827-ACT

ADAM17, também conhecido como TACE, é uma metaloprotease ancorada à membrana que catalisa a clivagem (shedding) do ectodomínio de diversos substratos, incluindo TNF-α, ligantes de EGFR (como anfregulina e TGF-α) e múltiplas moléculas de adesão. Por meio de proteólise regulada na superfície celular, TACE/ADAM17 integra a sinalização inflamatória a vias dependentes de fatores de crescimento, incluindo EGFR–MAPK/ERK e NF-κB, moldando a liberação de citocinas, a ativação de receptores e a remodelação tecidual. A atividade desregulada de ADAM17 tem sido associada à inflamação crônica e a redes de sinalização relacionadas ao câncer, sendo amplamente estudada por seu papel na comunicação entre células imunes, na homeostase epitelial e no crosstalk do microambiente.

TACE/ADAM17 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ADAM17 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TACE/ADAM17 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ADAM17 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ADAM17, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TACE/ADAM17. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ADAM17 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TACE/ADAM17 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TACE/ADAM17 em células tumorais com expressão de ADAM17 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.