Plasmide CRISPR d'Activation (h) TACC3: sc-402461-ACT

Le TACC3 humain (transforming acidic coiled-coil containing protein 3) est un facteur associé au centrosome et au fuseau mitotique, qui coordonne la dynamique des microtubules afin de soutenir l’assemblage du fuseau mitotique, la ségrégation des chromosomes et une progression fidèle du cycle cellulaire. Grâce à ses interactions avec des partenaires tels que la clathrine et chTOG, TACC3 contribue à la stabilisation des microtubules et à l’intégrité du fuseau, reliant ainsi sa fonction au contrôle du point de contrôle mitotique et à la stabilité génomique. Une expression dérégulée ou des réarrangements de TACC3 ont été observés dans de multiples contextes tumoraux et sont fréquemment étudiés en lien avec la signalisation proliférative, l’instabilité chromosomique et des programmes mitotiques altérés. Ces propriétés font de TACC3 un nœud utile pour étudier la biologie de la division cellulaire, les mécanismes d’aneuploïdie et les dépendances de voies associées à une prolifération rapide.

TACC3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TACC3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TACC3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TACC3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TACC3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TACC3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TACC3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TACC3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TACC3 dans les cellules tumorales présentant une expression de TACC3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.