Plasmide CRISPR d'Activation (h) TAB2: sc-401596-ACT

La TAB2 humaine (TAK1-binding protein 2) agit comme un adaptateur reliant la signalisation dépendante de la polyubiquitination à l’activation de MAP3K7/TAK1, en intégrant des signaux issus des voies du récepteur du TNF et des récepteurs Toll/IL-1. Grâce à ses interactions avec des intermédiaires ubiquitinylés et avec TAB1/TAB3, TAB2 favorise la signalisation en aval via NF-κB et les MAPK, modulant l’expression des gènes inflammatoires, les réponses au stress et les décisions de survie cellulaire. L’activité de TAB2 contribue à la régulation de l’activation de l’immunité innée et des programmes transcriptionnels induits par les cytokines. Une dérégulation de la signalisation associée à TAB2 a été impliquée dans des phénotypes inflammatoires et dans des contextes de signalisation liés au cancer, où une activation aberrante des voies NF-κB/MAPK soutient des états cellulaires pathogènes.

TAB2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TAB2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TAB2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TAB2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TAB2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TAB2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TAB2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TAB2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TAB2 dans les cellules tumorales présentant une expression de TAB2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.