Plasmide CRISPR/Cas9 KO T2R38 (h): sc-402279

Présentation

TAS2R38 code le récepteur du goût amer T2R38, un GPCR de classe A qui détecte des composés contenant une thiourée tels que le PTC/PROP et se couple à une signalisation associée à la gustducine afin de moduler des seconds messagers intracellulaires, notamment les flux de Ca²⁺, dans les cellules chimiosensorielles. Au-delà de la perception du goût au niveau oral, T2R38 est exprimé dans des épithéliums extra-oraux, où la signalisation des récepteurs amers contribue à la surveillance chimiosensorielle et à la régulation des réponses épithéliales. Des haplotypes fréquents de TAS2R38 modifient la sensibilité du récepteur et ont été étudiés comme déterminants génétiques de la perception de l’amertume et de la variabilité des comportements induits par la chimiosensation. En tant que récepteur sensoriel couplé aux GPCR, T2R38 constitue un modèle accessible pour disséquer la signalisation du récepteur, le contrôle de son expression et les relations génotype–phénotype dans des systèmes cellulaires humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO T2R38 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TAS2R38 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TAS2R38, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TAS2R38 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine T2R38.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TAS2R38 pour l'étude de la signalisation de T2R38, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TAS2R38 essentiels à la fonction de T2R38
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TAS2R38 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le T2R38 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le T2R38 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TAS2R38. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le T2R38 plasmide HDR (h) et le T2R38 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TAS2R38 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TAS2R38 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.