T-type Ca++ CP α1G Double Nickase Plasmid (h): sc-418331-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das T-type Ca++ CP α1G Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- T-type Ca++ CP α1G Double-Nickase-Plasmid (h) und T-type Ca++ CP α1G Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CACNA1G abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
T-type Ca++ CP α1G Double Nickase Plasmid (h) | sc-418331-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
T-type Ca++ CP α1G Double Nickase Plasmid (h2) | sc-418331-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CACNA1G kodiert die porenbildende Untereinheit CaV3.1 (α1G) von T‑Typ‑spannungsabhängigen Calciumkanälen, die bereits bei niedrigen Membranpotenzialen aktiviert werden und einen transienten Ca2+-Einstrom auslösen. Dieser Strom unterstützt rhythmisches Feuern, Rebound‑Burst‑Aktivität sowie calciumabhängige Signalwege, die in erregbaren und teilweise auch in nicht erregbaren Zellen die Membranerregbarkeit mit Genexpressionsprogrammen koppeln. Die Aktivität von CaV3.1 greift in Signalwege ein, die die intrazelluläre Ca2+-Homöostase, neuronale Oszillationen und die Kopplung von Erregung und Sekretion regulieren, und beeinflusst über calciumsensitive Effektoren Prozesse wie Zellzyklusprogression und Differenzierung. Eine Dysregulation der CACNA1G‑Expression oder der Kanalfunktion wurde mit veränderter elektrischer Erregbarkeit und Calcium‑Signalgebung bei neurologischen und kardiovaskulären Phänotypen in Verbindung gebracht, was CACNA1G zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien der Ionenkanalbiologie macht.
T-type Ca++ CP α1G Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CACNA1G-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CACNA1G abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CACNA1G-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CACNA1G-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.