Tβ-4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417057-ACT

A timosina beta-4, codificada pelo gene humano TMSB4X, é um peptídeo sequestrador de actina altamente conservado que regula a disponibilidade de G-actina e dá suporte à remodelação do citoesqueleto, à motilidade celular e a alterações na forma celular em resposta ao estresse. Ao modular a dinâmica da actina, influencia processos como migração, adesão e respostas celulares associadas à cicatrização, e tem sido relacionada a vias que controlam inflamação e remodelamento tecidual. Alterações na expressão de TMSB4X foram relatadas em diferentes contextos, incluindo progressão tumoral, sinalização angiogênica e estados fibróticos ou inflamatórios, tornando-o um nó útil para estudos mecanísticos de fenótipos dependentes do citoesqueleto. Como regulador do citoesqueleto amplamente expresso, o TMSB4X oferece um alvo viável para investigar como a homeostase da actina se conecta a programas transcricionais e a sinais do microambiente celular.

Tβ-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TMSB4X sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Tβ-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TMSB4X em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TMSB4X, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Tβ-4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TMSB4X nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Tβ-4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Tβ-4 em células tumorais com expressão de TMSB4X silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.