T-bet/TBX21 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400480-ACT

TBX21 kodiert T-bet, einen T-Box-Transkriptionsfaktor, der als Masterregulator der Typ-1-Immundifferenzierung fungiert. T-bet integriert Zytokin- und TCR-Signale, um die Chromatinzugänglichkeit und Transkriptionsprogramme zu steuern, die IFNG und andere Th1-assoziierte Gene kontrollieren, und beeinflusst dadurch die Reifung von NK-Zellen sowie deren zytotoxische Effektorfunktion. Über kreuzregulatorische Interaktionen mit liniendefinierenden Faktoren trägt TBX21 dazu bei, das Gleichgewicht zwischen Th1- und Th2-/Th17-Polarisierung zu regulieren, und koordiniert Antworten nachgeschaltet der IL-12/STAT4- und IFN/STAT1-Signalwege. Eine dysregulierte TBX21-Aktivität wurde mit immunvermittelten Entzündungen, erhöhter Infektanfälligkeit und veränderter Tumor-Immunüberwachung in Verbindung gebracht, was TBX21 zu einem wertvollen Knotenpunkt für mechanistische Studien der Immunpathologie macht.

T-bet/TBX21 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TBX21-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

T-bet/TBX21 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TBX21-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TBX21-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen T-bet/TBX21-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TBX21-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von T-bet/TBX21-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des T-bet/TBX21-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TBX21-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.