Plásmido CRISPR de Activación (h) Syntaxin 5: sc-402516-ACT

El gen humano **STX5** codifica la **sintaxina 5**, una Qa-SNARE central que media el acoplamiento de vesículas y la fusión de membranas dentro de la vía secretora temprana, respaldando el transporte del RE al Golgi y el tráfico intra-Golgi. Al coordinar el ensamblaje del complejo SNARE en el cis-Golgi y en el compartimento intermedio RE–Golgi, STX5 ayuda a mantener la organización del Golgi, la glicosilación de proteínas y la secreción polarizada. La alteración del tráfico dependiente de STX5 puede perturbar la proteostasis y el procesamiento de glicanos, afectando vías que regulan la maduración de receptores, la localización de proteínas de membrana y el manejo de la carga secretora. En la literatura, la disfunción de la vía secretora que involucra a STX5 se ha vinculado con respuestas celulares al estrés y con fenotipos relevantes para los trastornos congénitos de la glicosilación y, de forma más amplia, para mecanismos patogénicos asociados a alteraciones del tráfico vesicular.

Syntaxin 5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de STX5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Syntaxin 5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus STX5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional STX5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Syntaxin 5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo STX5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Syntaxin 5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Syntaxin 5 en células tumorales con expresión de STX5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.