Plasmide CRISPR/Cas9 KO Syncoilin (h): sc-406493

Présentation

Le gène humain **SYNC** code la syncoïline, une protéine associée aux filaments intermédiaires, particulièrement abondante dans les muscles squelettique et cardiaque, et qui se localise au niveau du sarcolemme et des régions du disque Z. La syncoïline participe à l’organisation du cytosquelette en reliant les réseaux de filaments intermédiaires aux complexes protéiques associés à la dystrophine, soutenant ainsi l’intégrité des fibres musculaires et la mécanotransduction lors de la contraction. Par ces interactions, elle contribue à la différenciation myogénique, à la stabilité du sarcolemme et au maintien de l’architecture musculaire sous contrainte mécanique. Des modifications de l’expression de **SYNC** et une mauvaise localisation de la syncoïline ont été rapportées dans des contextes de pathologies musculaires, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude du remodelage du cytosquelette associé aux myopathies et des voies de réponse au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Syncoilin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SYNC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SYNC, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SYNC à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Syncoilin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SYNC pour l'étude de la signalisation de Syncoilin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SYNC essentiels à la fonction de Syncoilin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SYNC pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Syncoilin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Syncoilin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SYNC. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Syncoilin plasmide HDR (h) et le Syncoilin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SYNC pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SYNC définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.