Synaptotagmin XI CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404323-ACT

SYT11 kodiert das humane Synaptotagmin XI, ein Mitglied der Synaptotagmin-Familie, die an der Regulation des intrazellulären Membrantransports und der Vesikeldynamik beteiligt ist. Synaptotagmin XI wurde mit der Kontrolle von Exozytose und endozytotischem Recycling in Verbindung gebracht und beeinflusst damit den Umsatz synaptischer Vesikel sowie allgemeinere Prozesse des sekretorischen Wegs in Neuronen und anderen sekretorischen Zelltypen. Über Effekte auf Vesikel-Andocken, Fusionskompetenz und Organellenhomöostase kann SYT11 mit Signalwegen verknüpft sein, die Neurotransmission, Autophagie-Lysosomen-Funktion und zelluläre Stressantworten steuern. Eine veränderte SYT11-Expression oder genetische Variation wurde in Forschungskontexten zu neurodegenerativen und neuroinflammatorischen Erkrankungen beschrieben, was seinen Einsatz in Studien zur neuronalen Vulnerabilität und zu Mechanismen synaptischer Dysfunktion unterstützt.

Synaptotagmin XI Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SYT11-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Synaptotagmin XI Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SYT11-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SYT11-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Synaptotagmin XI-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SYT11-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Synaptotagmin XI-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Synaptotagmin XI-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SYT11-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.