Synaptotagmin IV CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423246

Übersicht

Syt4 kodiert Synaptotagmin IV, ein atypisches Mitglied der Synaptotagmin-Familie, das an der aktivitätsabhängigen Regulation des Vesikeltransports und der Exozytose in Neuronen und neuroendokrinen Zellen beteiligt ist. Im Unterschied zu kanonischen Ca2+-Sensoren moduliert Synaptotagmin IV den Zyklus synaptischer Vesikel, die Freisetzungswahrscheinlichkeit von Neurotransmittern und die präsynaptische Plastizität und verknüpft so Membrandynamik mit neuronalen Aktivitätsprogrammen. Die Funktion von Syt4 überschneidet sich mit der SNARE-vermittelten Fusionsmaschinerie, dem endo-/exozytotischen Membranrecycling sowie calciumabhängigen Signalwegen, die die Anpassung auf Schaltkreisebene prägen. Eine dysregulierte SYT4-Expression oder -Funktion wurde mit veränderten Phänotypen der synaptischen Plastizität in Verbindung gebracht und wird im Kontext krankheitsrelevanter Mechanismen neuroentwicklungsbedingter und neuropsychiatrischer Erkrankungen untersucht.

Das Synaptotagmin IV CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Syt4-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Syt4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Syt4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Synaptotagmin IV-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Syt4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Synaptotagmin IV-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Syt4-Exone abzielen, die für die Synaptotagmin IV-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Syt4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Synaptotagmin IV CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Synaptotagmin IV CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Syt4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Synaptotagmin IV HDR-Plasmid (m) und Synaptotagmin IV HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Syt4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Syt4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.