Synaptopodin Double Nickase Plasmid (h): sc-400486-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Synaptopodin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Synaptopodin Double-Nickase-Plasmid (h) und Synaptopodin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SYNPO abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Synaptopodin: sc-515842
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Synaptopodin Double Nickase Plasmid (h) | sc-400486-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Synaptopodin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400486-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SYNPO kodiert Synaptopodin, ein aktinassoziiertes Protein, das das Zytoskelett in spezialisierten Zellkompartimenten organisiert, darunter neuronale dendritische Dornen (Spines) und die Fußfortsätze von Podozyten in der Niere. Synaptopodin moduliert die Dynamik von Aktinfilamenten, indem es die Signalübertragung von GTPasen der Rho-Familie und aktinregulatorische Komplexe koordiniert, und beeinflusst dadurch Zellform, Adhäsion und Motilität. In Neuronen trägt es zur Reifung der Spines und zur synaptischen Plastizität bei, während es in Podozyten die Integrität der Schlitzmembran und die Homöostase der Filtrationsbarriere unterstützt. Veränderte SYNPO-Expression oder -Funktion wurde mit zytoskelettaler Instabilität in Verbindung gebracht und wird im Kontext proteinurischer Nierenerkrankungen sowie synaptischer Dysfunktionen im Zusammenhang mit Neurodegeneration untersucht.
Synaptopodin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SYNPO-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SYNPO abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SYNPO-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SYNPO-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.