SWAP-70 Double Nickase Plasmid (h2): sc-403465-NIC-2
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SWAP-70 Double Nickase Plasmid (h2) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SWAP-70 Double-Nickase-Plasmid (h2) und SWAP-70 Double-Nickase-Plasmid (h22) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SWAP70 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SWAP-70: sc-390431
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SWAP-70 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403465-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen SWAP70 kodiert SWAP-70, einen phosphatidylinositolbindenden Signaladapter, der nachgeschaltet der PI3K an aktivierte Membranen rekrutiert wird und das von GTPasen der Rho-Familie abhängige Remodeling des Aktinzytoskeletts unterstützt. SWAP-70 trägt zur Aktivierung, Adhäsion und Migration von Immunzellen bei, indem es die Zytoskelettdynamik und rezeptorvermittelte Signalgebung in Prozessen wie B‑Zell-Antworten, antigenabhängigem Trafficking und phagozytischen Funktionen koordiniert. Eine Fehlregulation SWAP70-assoziierter Signalwege wurde im Zusammenhang mit Immunfunktionsstörungen sowie mit Motilität/Invasion von Tumorzellen untersucht, wobei verändertes Aktin-Remodeling das Zellverhalten beeinflussen kann. Modelle zur Perturbation von SWAP70 ermöglichen mechanistische Studien der PI3K–Rac/Rho-Signalgebung, des Membrantraffickings und zytoskelettkontrollierter Phänotypen, indem mithilfe von Geneditierung Effekte auf Migration, Morphologie und stimulusabhängige Signaloutputs gezielt analysiert werden.
SWAP-70 Das Double-Nickase-Plasmid (h2) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SWAP70-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SWAP70 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SWAP70-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SWAP70-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.